適用于所有qPCR儀器的通用型預(yù)混液
PowerUp? SYBR? Green預(yù)混液的特性包括：
特異性強(qiáng)：雙重?zé)釂?dòng)機(jī)制提供了出眾的特異性
重復(fù)性高：在較寬的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)都能獲得可重復(fù)性的Ct值
靈活性高：適用于標(biāo)準(zhǔn)或快速循環(huán)，50分鐘內(nèi)即可獲得結(jié)果
抗污染能力強(qiáng)：采用UNG和 dUTP配方，可防止殘留PCR產(chǎn)物污染
穩(wěn)定性高：制備好qPCR反應(yīng)板后，可以在室溫下穩(wěn)定保存72小時(shí)
通用性強(qiáng)：廣泛適用于市面上的儀器
為最大限度保證特異性和可重復(fù)性而配制
PowerUp? SYBR? Green預(yù)混液含有我們Dual-Lock? Taq DNA聚合酶，后者結(jié)合了兩種熱啟動(dòng)機(jī)制來(lái)控制自身的活性。這種雙重?zé)釂?dòng)途徑可以對(duì)Taq的活化進(jìn)行嚴(yán)格的控制，有助于防止聚合酶在低溫下出現(xiàn)不需要的過(guò)早活化，從而避免非特異性擴(kuò)增。Dual-Lock? Taq 配制成了方便的2X預(yù)混液形式，其中含有一套經(jīng)優(yōu)化的緩沖體系、添加劑以及除垢劑成分，可以進(jìn)一步提升PowerUp? SYBR? Green預(yù)混液的特異性.
在采用PowerUp? SYBR? Green預(yù)混液評(píng)估24種不同的引物組時(shí)，無(wú)需進(jìn)行引物優(yōu)化或重新設(shè)計(jì)引物，即可通過(guò)100%反應(yīng)獲得單一熔解曲線。相反，在采用幾家競(jìng)爭(zhēng)廠商的預(yù)混液時(shí)，在分析一些相同的靶標(biāo)時(shí)，出現(xiàn)了非特異性擴(kuò)增，如圖所示，熔解曲線之中出現(xiàn)了多個(gè)峰（圖1）。SYBR?反應(yīng)的特異性驗(yàn)證是保證數(shù)據(jù)質(zhì)量和有效性(Bustin et al; 2009)的必要步驟。PowerUp? SYBR? Green預(yù)混液具有高度特異性，使您可以縮減為獲得優(yōu)質(zhì)數(shù)據(jù)而投入在優(yōu)化和重新設(shè)計(jì)引物方面的時(shí)間和經(jīng)費(fèi).
可重復(fù)性是衡量實(shí)時(shí)定量PCR數(shù)據(jù)質(zhì)量的另一指標(biāo)，而可重復(fù)性經(jīng)常會(huì)在低模板濃度時(shí)出現(xiàn)下降，而這又會(huì)加劇影響數(shù)據(jù)波動(dòng)。但在采用一系列檢測(cè)靶標(biāo)進(jìn)行測(cè)試時(shí)，采用雙重?zé)釂?dòng)Taq DNA聚合酶的PowerUp? SYBR? Green預(yù)混液在較寬的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)展現(xiàn)出了良好的可重復(fù)性（圖2）。其良好的可重復(fù)性使您在分析低豐度轉(zhuǎn)錄本和較小的倍數(shù)變化時(shí)，獲得更具意義的結(jié)果.??
圖1:?在QuantStudio? 7儀器上采用5種不同的預(yù)混液對(duì)3種靶標(biāo)進(jìn)行熔解曲線分析。我們針對(duì)每種預(yù)混液采用了廠商推薦的反應(yīng)條件，分別選用了6 個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)稀釋倍比的人通用參照cDNA進(jìn)行分析.競(jìng)爭(zhēng)廠商B:?BioRad (SsoAdvanced?Universal SYBR? Green Supermix);?競(jìng)爭(zhēng)廠商R:?Roche (LightCycler? 480 SYBR? Green I Master);?競(jìng)爭(zhēng)廠商QB:?Quanta Bioscenices (PerfeCTA? SYBR? Green SuperMix );?競(jìng)爭(zhēng)廠商Q:?Qiagen (QuantiTect SYBR? Green PCR Kit).
圖2:?在7900儀器上，選取300 nM的兩批PowerUp? SYBR?預(yù)混液進(jìn)行了24次四重。繪制相對(duì)于平均Ct的Ct標(biāo)準(zhǔn)偏差。平均Ct>34的情況被本次分析排除在外。
可在較寬的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)獲得可靠的結(jié)果
PowerUp? SYBR? Green預(yù)混液可使100 ng - 0.1 pg cDNA/次反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)獲得穩(wěn)定、可靠的結(jié)果。1能在較寬的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)獲得一致的擴(kuò)增，是qPCR方法及使用ΔΔCt方法進(jìn)行基因表達(dá)分析的基本前提。與其他競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品不同，在動(dòng)態(tài)范圍實(shí)驗(yàn)中，PowerUp? SYBR? Green預(yù)混液未在高cDNA起始量、低相關(guān)系數(shù)下出現(xiàn)抑制現(xiàn)象，在6個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)的起始樣品量下均維持了穩(wěn)定的效率，最大限度確保了數(shù)據(jù)質(zhì)量的可信度（圖3，表1）.
圖 3:? PowerUp? SYBR? Green預(yù)混液在較寬的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)表現(xiàn)出了可靠的性能 我們分別選用6個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)稀釋的人通用參照cDNA，獲得了PGK1基因的擴(kuò)增曲線。反應(yīng)在QuantStudio? 7儀器上依照制造商推薦的實(shí)驗(yàn)流程分三次進(jìn)行。競(jìng)爭(zhēng)廠商的預(yù)混液表現(xiàn)出了更高的抑制性，
具體證據(jù)在曲線形狀中可以看出，最高cDNA起始量時(shí)的稀釋點(diǎn)間的間距較小。此外，還有幾家競(jìng)爭(zhēng)廠商的預(yù)混液無(wú)法在最低稀釋點(diǎn)檢測(cè)到可靠的結(jié)果.競(jìng)爭(zhēng)廠商 B1:?BioRad (SsoAdvanced?Universal SYBR? Green Supermix);競(jìng)爭(zhēng)廠商 B2:?SsoFast? EvaGreen? SuperMix;?競(jìng)爭(zhēng)廠商R:?Roche(LightCycler? 480 SYBR? Green I Master);?競(jìng)爭(zhēng)廠商 QB:?QuantaBioscenices(PerfeCTA? SYBR? Green SuperMix );?競(jìng)爭(zhēng)廠商 Q:Qiagen(QuantiTect SYBR? Green PCRKit).
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表1.?競(jìng)爭(zhēng)廠商的預(yù)混液的4項(xiàng)檢測(cè)的動(dòng)態(tài)范圍比較。表中的數(shù)字表示10倍稀釋的線性范圍，此項(xiàng)指標(biāo)根據(jù)每一種預(yù)混液的各個(gè)靶標(biāo)測(cè)得。例如，6表示跨越了7次10倍稀釋的范圍，在10uL的反應(yīng)體系中cDNA的濃度從100ng稀釋到了0.1pg.
廣泛的儀器兼容性
PowerUp? SYBR? Green預(yù)混液可在標(biāo)準(zhǔn)及快速PCR模式下使用，其兼容所有Applied Biosystems? 實(shí)時(shí)定量PCR儀器。2 此外，還可兼容Bio-Rad IQ?5、Roche LightCycler? 480和Agilent Mx3005P?系統(tǒng)。為確保獲得最佳的結(jié)果，建議的引物濃度應(yīng)介于300–800 nM之間.
2?為確保最佳的實(shí)驗(yàn)性能，建議采用僅適用于Applied Biosystems? 7900系統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件.
持續(xù)72小時(shí)的預(yù)混反應(yīng)穩(wěn)定性
在至多72小時(shí)內(nèi)，PowerUp? SYBR? Green預(yù)混液及其Dual-Lock?Taq DNA聚合酶表現(xiàn)出了一致的預(yù)混反應(yīng)性能（表2）。此預(yù)混液的穩(wěn)定性使得用戶(hù)可以在進(jìn)行PCR反應(yīng)之前靈活地設(shè)置孔板，而不對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響.3
3?Pre-PCR穩(wěn)定性不僅受到預(yù)混液影響，還受到分析的靶標(biāo)影響。為確保最佳的可信度，研究人員應(yīng)驗(yàn)證自身具體靶標(biāo)的穩(wěn)定性曲線.
表2.?PCR預(yù)混物的穩(wěn)定性。使用PowerUp? SYBR? Green預(yù)混液在StepOnePlus?實(shí)時(shí)定量PCR系統(tǒng)上從1ng人cDNA中擴(kuò)增幾種靶標(biāo)，分別選擇反應(yīng)設(shè)置后立即擴(kuò)增或室溫避光72小時(shí)后擴(kuò)增。在0小時(shí)和72小時(shí)兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)都可以得到單一熔解曲線.
用于遺留污染控制的尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG)
在實(shí)驗(yàn)室中，操作常規(guī)PCR時(shí)所存在的污染是令很多研究者頭疼的問(wèn)題，同時(shí)也是假陽(yáng)性結(jié)果的一大重要來(lái)源。PowerUp? SYBR? Green預(yù)混液含有UNG和dUTP，能夠降解任何之前擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物，以免其污染之后的qPCR反應(yīng)。PowerUp? SYBR? Green預(yù)混液使用熱不穩(wěn)定性的UNG酶，能夠有效地控制污染物，同時(shí)又不影響后續(xù)的PCR產(chǎn)物下游分析，如熔解曲線或凝膠分析.