演繹酶切華麗樂(lè)章
??Anza限制性內(nèi)切酶克隆完整系統(tǒng)由以下部分組成：

??128種限制性內(nèi)切酶
???5種DNA修飾酶

1. 1.?4 DNA 連接酶預(yù)混液
2. 2.熱敏堿性磷酸酶
3. 3.T4多聚核苷酸激酶試劑盒
   
4. 4.DNA平端化試劑盒
5. 5.DNA末端修復(fù)試劑盒

所有的Anza限制性內(nèi)切酶可以同時(shí)進(jìn)行酶切，并且只需一種統(tǒng)一Anza緩沖液便能充分發(fā)揮出全部功能。

簡(jiǎn)單易用的Anza限制性內(nèi)切酶

Anza限制性內(nèi)切酶只需簡(jiǎn)易的兩步方案即可使用，不管內(nèi)切酶有幾種，不管所使用的是哪種DNA類型——只需配置反應(yīng)混合液，然后在37°C孵化15分鐘。

簡(jiǎn)單的酶切方案

1.按照表1所示依序添加試劑來(lái)配置反應(yīng)混合液。

2.在37°C孵化15分鐘。

表1：

體積可按比例放大至5倍。

方便的緩沖液

所有Anza限制性內(nèi)切酶均提供Anza? 10X緩沖液和Anza? 10X紅色緩沖液，可以根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)需求靈活選擇。紅色緩沖液包括一種密度試劑，其含有紅色或黃色示蹤染料，在1%瓊脂糖凝膠上兩種染料分別與800 bp DNA片段和10 bp DNA片段一同遷移。這省去了凝膠上樣前繁瑣的染料添加步驟，且與下游的各種實(shí)驗(yàn)應(yīng)用兼容。*

*對(duì)于需要通過(guò)熒光激發(fā)來(lái)分析的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用，我們推薦使用Anza 10X緩沖液，因?yàn)锳nza 10X 紅色緩沖液中的黃色染料可能會(huì)影響一些熒光的檢測(cè)。

產(chǎn)品特性

1.完全酶切

Anza?限制性內(nèi)切酶僅需15分鐘即可酶切完全，且一個(gè)統(tǒng)一酶切方案適用于所有DNA類型。

在15分鐘內(nèi)完成質(zhì)粒DNA和PCR產(chǎn)物的酶切

卓越的性能

圖1. Anza限制性內(nèi)切酶在15分鐘內(nèi)完成酶切反應(yīng)。?使用Anza 11 EcoRI、Anza 12 XbaI和Anza 1 NotI對(duì)質(zhì)粒DNA(6,215 bp)和純化的PCR產(chǎn)物(1.6 kb)進(jìn)行酶切。按照推薦的方案配置反應(yīng)混合液，在20μL最終體積內(nèi)含有1 μg DNA和1 μL的限制性內(nèi)切酶。在37°C孵化15分鐘。

• L - 1 Kb Plus DNA Ladder
• C1?– 未酶切的質(zhì)粒DNA
• 1 – Anza? 11 EcoRI
• 2 – Anza? 12 XbaI
• 3 – Anza? 1 NotI
• C2?– 未酶切的PCR片段
• 4 – Anza? 11 EcoRI
• 5 – Anza? 12 XbaI
• 6 – Anza? 1 NotI

質(zhì)粒DNA預(yù)期酶切DNA片段：
Anza 11 EcoRI, Anza 12 XbaI, Anza 1 NotI - 6,215 bp
純化后的PCR產(chǎn)物預(yù)期酶切DNA 片段：
Anza 11 EcoRI - 1,133 & 506 bp
Anza 12 XbaI - 1,077 & 562 bp
Anza 1 NotI - 1,258 & 381 bp?

質(zhì)粒DNA的酶切

• L - 1 Kb Plus DNA Ladder
• C – 未酶切的質(zhì)粒DNA
• 1 – Anza? 3 BcuI
• 2 – SpeI-HF (Competitor N)
• 3 – Anza? 47 Eco52I
• 4 – EagI-HF (Competitor N)
預(yù)期的DNA片段
Anza 3 BcuI - 5,529 & 686 bp
Anza 47 Eco52I - 4,575, 1,191, & 449 bp

PCR產(chǎn)物的酶切

圖3. Anza限制性內(nèi)切酶在15分鐘內(nèi)完成酶切反應(yīng)。?使用Anza 3 BcuI、Anza 9 NdeI和Anza 47 Eco521對(duì)純化的PCR產(chǎn)物(6,215bp)進(jìn)行酶切，同時(shí)使用競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手N的SpeI-HF（BcuI的同裂酶）、NdeI和EagI-HF（Eco52I的同裂酶）。按照推薦的實(shí)驗(yàn)方案，反應(yīng)混合物包括1 μg DNA 和1 μLAnza?限制內(nèi)切酶，總反應(yīng)體積20μL。按照競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手N推薦的實(shí)驗(yàn)方案，反應(yīng)混合物包括1 μg DNA 和1 μL 競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手N的限制性內(nèi)切酶，總體積50 μL。37°C條件下孵化15分鐘。

• L - 1 Kb Plus DNA Ladder
• C – 未酶切的DNA
• 1 – Anza 3 BcuI
• 2 – SpeI-HF (Competitor N)
• 3 – Anza 9 NdeI
• 4 – NdeI (Competitor N)
• 5 – Anza 47 Eco52I
• 6 – EagI-HF (Competitor N)

預(yù)期的DNA片段
Anza 3 BcuI - 938, 346, 322, & 33 bp
Anza 9 NdeI - 1,486 & 153 bp
Anza 47 Eco52I - 899, 381, 197, & 162 bp

2.無(wú)星號(hào)活性

一些限制性內(nèi)切酶可能出現(xiàn)星號(hào)活性，或者表現(xiàn)出限制酶與DNA識(shí)別位點(diǎn)的識(shí)別特異性降低。當(dāng)反應(yīng)條件不是最佳，如甘油濃度過(guò)高或Mg2+存在時(shí)，可能出現(xiàn)星號(hào)活性，其可導(dǎo)致DNA的非特異性剪切。Anza限制性內(nèi)切酶經(jīng)優(yōu)化具有靈活的酶切時(shí)間-從15分鐘到過(guò)夜酶切均可進(jìn)行完全酶切-無(wú)需擔(dān)心星號(hào)活性。

將質(zhì)粒DNA和PCR產(chǎn)物酶切16小時(shí)???????????????????????????????????????

圖4.使用 Anza限制性內(nèi)切酶即使過(guò)夜酶切后也無(wú)星號(hào)活性。?使用Anza 11 EcoRI、Anza 12 XbaI和Anza 1 NotI對(duì)質(zhì)粒DNA (6,215 bp)和純化的PCR產(chǎn)物(1.6 kb)進(jìn)行酶切。反應(yīng)混合物中包括1 酶切。反應(yīng)混和1 酶切限制性內(nèi)切酶，總體積為20 μL，按照推薦的實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行酶切。在37照推孵育16小時(shí)。

• L - 1 Kb Plus DNA Ladder
• C1?– 未酶切質(zhì)粒 DNA
• 1 – Anza? 11 EcoRI
• 2 – Anza? 12 XbaI
• 3 – Anza? 1 NotI
• C2?– 未酶切PCR片段
• 4 – Anza? 11 EcoRI
• 5 – Anza? 12 XbaI
• 6 – Anza? 1 NotI
質(zhì)粒DNA預(yù)期酶切片段
Anza 11 EcoRI, Anza 12 XbaI, Anza 1 NotI - 6,215 bp
純化的PCR產(chǎn)物預(yù)期酶切片段
Anza 11 EcoRI - 1,133 & 506 bp
Anza 12 XbaI - 1,077 & 562 bp
Anza 1 NotI - 1,258 & 381 bp?

3.多重酶切使用一種統(tǒng)一緩沖液

使用Anza統(tǒng)一緩沖液，Anza限制性內(nèi)切酶可在同一反應(yīng)中進(jìn)行完全的多重酶切。無(wú)需再費(fèi)力查找與您所使用的酶兼容的緩沖液，同時(shí)只需一種酶切實(shí)驗(yàn)方案即可完成所有酶切反應(yīng)，從而節(jié)省了時(shí)間。

雙酶切

• L - 1 Kb Plus DNA Ladder
• C – 未酶切質(zhì)粒 DNA
• 1 – Anza? 47 Eco52I
• 2 – Anza? 14 SalI
• 3 – Anza? 47 Eco52I + Anza? 14 SalI
• 4 – EagI-HF (Competitor N)
• 5 – SalI-HF (Competitor N)
• 6 – EagI-HF + SalI-HF (Competitor N)
預(yù)期酶切DNA片段
Anza 47 Eco52I - 4,575, 1,191, & 449 bp
Anza 14 SalI - 4,030 & 2,185 bp
Anza? 47 Eco52I + Anza? 14 SalI - 2,185, 1,319, 1,191, 1,071, & 449 bp

三重酶切

圖6. Anza限制性內(nèi)切酶可在統(tǒng)一緩沖液中實(shí)現(xiàn)三種酶的完全酶切。?使用Anza 1 NotI、Anza 16 HindIII和Anza 15 XmaJI對(duì)質(zhì)粒DNA (6215 bp)進(jìn)行酶切。單酶切反應(yīng)的反應(yīng)混合物包括1 酶切。單酶切和1 酶切限制性內(nèi)切酶，總體積為20 內(nèi)切。三重酶切反應(yīng)混合物中包括1 重酶切反應(yīng)混和各種限制性內(nèi)切酶各1 種限，總體積為30 積為，按照推薦的實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行酶切。37照推孵育15分鐘。

• C – 未酶切質(zhì)粒 DNA
• 1 – Anza? 1 NotI
• 2 – Anza? 16 HindIII
• 3 – Anza? 15 XmaJI
• 4 – Anza? 1 NotI + Anza? 16 HindIII + Anza? 15 XmaJI
• L - 1 Kb Plus DNA Ladder
預(yù)期DNA酶切片段
Anza 1 NotI - 6,215 bp
Anza 16 HindIII - 6,215 bp
Anza 15 XmaJI - 6,215 bp
Anza 1 NotI + Anza 16 HindIII + Anza 15 XmaJI - 4,285, 1,075, & 855 bp