三維(3D)培養(yǎng)物、球狀體和類器官作為癌癥生物學研究的模型越來越受歡迎。與傳統(tǒng)細胞培養(yǎng)相比,這些3D模型提高了科學家研究治療效果的能力。這些3D培養(yǎng)物可能有幾百微米厚,如何對如此厚的樣本深處的細胞內的生物標記物成像,成為了一大難題。
Douglas Richardson博士是一家全球公認的生物成像中心的主任。他使用來自誘導多能干細胞(iPSCs)的皮質神經器官作為成像和顯微研究樣本。這些類球體直徑約為600微米,是細胞寬度(平均8微米)的75倍。圖像(右上圖)顯示了Sir-Hoechst?染色劑識別的這些皮層神經器官,此過程使用Zeiss?LSM 880共焦顯微鏡上的25xLD-LCI油浸物鏡成像。
說到真正的3D分析-目前可以橫向和軸向捕捉深層組織內的清晰圖像。Invitrogen? ProLong?Glass抗淬滅封固劑可讓科學家以比任何其他商用硬質封固劑更高的深度捕獲3D培養(yǎng)物的清晰圖像。
ProLong Glass抗淬滅封固劑是一種即用型硬質封片劑,在固化后具有1.52的玻璃匹配折射率。該產品可將油浸式顯微鏡鏡頭與3D培養(yǎng)物之間的折射率不匹配降至最低。
優(yōu)勢包括:
? 焦點深度提高逾3倍
? 高達75%的軸向分辨率
? 卓越的橫向分辨率
它還為有機熒光團和熒光蛋白提供出色的信噪比和光漂白保護。這使其非常適合制作清晰,明亮,高品質的3D圖像。
在評估細胞健康、遺傳毒性和抗癌藥物的效力時,細胞增殖分析是重要的一環(huán)。但增殖很少單獨進行分析;增殖分析通常與其他細胞功能檢測探針聯用以提供細胞狀態(tài)的更多信息。為了保留對這些細胞功能探針的檢測,Invitrogen? ClickiT? Plus EdU細胞增殖檢測不僅提供了更高的性能和更簡便的工作流程,而且與更多的熒光探針兼容 - 包括GFP,RFP和藻膽蛋白-可以讓您進行多重檢測,提供細胞狀態(tài)更豐富的信息。
具有諷刺意味的是,細胞死亡機制對于多細胞生物的存活至關重要。細胞凋亡或程序性細胞死亡通過消除不需要的細胞和組織,同時破壞病毒感染或DNA損傷的細胞來降低致病威脅,對于生物體的正常生長和發(fā)育是必不可少的。
這種程序性細胞死亡功能的失活是癌癥發(fā)展的核心。Invitrogen? CellEvent? Caspase-3/7Green檢測試劑是一種新型熒光底物,可用于檢測活化的caspase-3和-7,從而使您可以更輕松地利用上述試劑研究癌癥的關鍵過程。該試劑與高內涵成像兼容,可與其他探針聯用研究細胞凋亡和細胞生理,從而在其他關鍵細胞功能的背景下研究細胞死亡。
更豐富地鑒定增殖。在這張人類惡性黑色素瘤的圖像中,您不僅可以區(qū)分增殖細胞(粉紅色細胞核)和非增殖細胞(藍色細胞核),還可識別正在開始增殖的細胞(藍色細胞核含有一些粉紅色)和活躍分裂的細胞(藍綠色細胞核與橙色紡錘)。
將細胞凋亡復合成像以獲得完整圖像。首先用CellEvent Caspase-3/7 Green檢測試劑(綠色)染色依托泊苷誘導細胞凋亡的U2OS人骨肉瘤細胞以檢測細胞凋亡,然后用Invitrogen? MitoTracker?Deep Red FM染料(粉紅色)標記線粒體。固定和透化后,用Invitrogen? Alexa Fluor? 546鬼筆環(huán)肽(橙色)標記肌動蛋白。