發(fā)布時(shí)間：2016-5-19
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TaqMan? advanced miRNA分析采用qPCR技術(shù)，可對(duì)成熟miRNA進(jìn)行高敏感性和高特異性定量。通過(guò)配合使用TaqMan? advanced miRNA cDNA合成試劑盒，該解決方案可提供簡(jiǎn)單的前期工作流程，適用于分析單個(gè)樣本中的多個(gè)miRNA靶標(biāo)或低RNA水平的血清和血漿樣本，并具有出色的靈敏度和特異性。
通用的逆轉(zhuǎn)錄 (RT) ——所有TaqMan advanced miRNA分析均使用同一種逆轉(zhuǎn)錄步驟
靈敏度——在用于cDNA合成的起始樣本中，低至60拷貝數(shù)的miRNA都可檢測(cè)到
特異性——只檢測(cè)成熟miRNA和區(qū)分高度相似的靶標(biāo)
樣本輸入量小——可對(duì)低至1 pg總RNA或2 μL血漿中的成熟miRNA進(jìn)行檢測(cè)和定量
與人體血清、血漿和組織等生物液體樣本兼容
卓越的靈敏度
TaqMan advanced miRNA系統(tǒng)可有效處理典型的低RNA量的血清和血漿樣本。與傳統(tǒng)的預(yù)擴(kuò)增不同，基于連接反應(yīng)的cDNA合成試劑盒采用的miR-Amp引物能識(shí)別添加在每個(gè)miRNA 5’和3’端的通用序列，從而避免擴(kuò)增偏向。作為敏感性和特異性最高的檢測(cè)方法代表，TaqMan advanced miRNA分析能準(zhǔn)確檢測(cè)1 pg總RNA或2 μL血清/血漿中低至60個(gè)拷貝數(shù)。
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圖1：動(dòng)態(tài)范圍和靈敏度.
金標(biāo)準(zhǔn)TaqMan特異性
TaqMan advanced miRNA分析可輕松區(qū)分僅相差一個(gè)堿基的緊密相關(guān)的成熟miRNAs。對(duì)于同源miRNA 5’端高度保守的“種子區(qū)域”，TaqMan advanced miRNA系統(tǒng)表現(xiàn)出卓越的特異性和靈敏度，即使相差一個(gè)堿基，也能很好區(qū)分。
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圖2：對(duì)緊密相關(guān)的miRNA具有特異性。
通用的逆轉(zhuǎn)錄
TaqMan advanced miRNA cDNA合成試劑盒具有通用的逆轉(zhuǎn)錄步驟，使前期工作流程更簡(jiǎn)單。在逆轉(zhuǎn)錄前，使用3’端加上poly-A尾巴和5’端連接一個(gè)接頭序列在每個(gè)末端延伸miRNA。隨后，利用通用的miR-Amp引物和miR-Amp預(yù)混液對(duì)cDNA進(jìn)行擴(kuò)增，均勻地增加每個(gè)靶標(biāo)的cDNA量。
該試劑盒適用于：
工作流程?
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Step 1樣品制備
Step 2逆轉(zhuǎn)錄
Step 3miR-Amp通用擴(kuò)增
Step 4使用TaqMan advanced miRNA分析進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR
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