流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cytometry, FCM）能夠在短時(shí)間內(nèi)檢測(cè)分析或分選大量細(xì)胞，在血液學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、藥物學(xué)等領(lǐng)域中的應(yīng)用越來(lái)越廣泛。
與此同時(shí)，流式實(shí)驗(yàn)需要注意的問(wèn)題也越來(lái)越受關(guān)注，其中，流式抗體的純度、批次穩(wěn)定性、特異性，以及流式結(jié)果的可重復(fù)性備受重視。今天，我們就來(lái)扒一扒流抗與細(xì)胞之間非特異性結(jié)合的問(wèn)題。
一個(gè)抗體分子上的兩個(gè)抗原結(jié)合部位是相同的，位于兩臂末端稱(chēng)抗原結(jié)合片段（antigen-binding fragment, Fab）。'Y'的柄部稱(chēng)結(jié)晶片段（crystalline fragment,Fc），糖結(jié)合在FC 上。Fab是抗原結(jié)合片段，直接結(jié)合抗原。直接效應(yīng)。Fc是結(jié)晶片段，間接效應(yīng)端。
抗體與細(xì)胞的結(jié)合過(guò)程中一般會(huì)出現(xiàn)以下情況：
在抗體孵育過(guò)程中，只有抗體的Fab端與目標(biāo)抗原結(jié)合（特異性結(jié)合）時(shí)，這樣的流式圖才能反應(yīng)出細(xì)胞抗原表達(dá)的真實(shí)情況。
但是，在分子間各種作用力的推動(dòng)下，抗體FC端也經(jīng)常與細(xì)胞表面的FC受體結(jié)合，即我們常說(shuō)的非特異性結(jié)合，此時(shí)流式結(jié)果就往往不能反映真正的抗原表達(dá)情況。
那么，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中如何避免這種非特異性情況的出現(xiàn)呢？
大家對(duì)于前兩種方式應(yīng)該比較熟悉了。那么，什么是重組基因工程改造抗體呢？這種抗體又有哪些獨(dú)特之處呢？
REAfinity? Recombinant Antibodies
重組基因工程改造抗體
如上圖所示，REAfinity?重組基因工程改造抗體的制備過(guò)程與傳統(tǒng)雜交瘤抗體不同，因此也具備獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)：高純度、批次穩(wěn)定性、高重復(fù)性：
REAfinity?抗體是挑選市場(chǎng)上最佳克隆號(hào)的抗體，克隆出特異性的Fab片段，因此，特異性和親和力都非常高
將該Fab序列與人IgG1 Fc段序列重組，同時(shí)，對(duì)Fc段序列進(jìn)行點(diǎn)突變，使其不會(huì)對(duì)Fc γ受體產(chǎn)生非特異性結(jié)合，因此也無(wú)需使用FC受體阻斷劑。同時(shí)，只需要根據(jù)熒光素選擇相應(yīng)的通用型同型對(duì)照抗體，無(wú)需根據(jù)FC端亞型選擇各種Isotype，一舉多得
如圖，使用REAfinity抗體時(shí)，無(wú)需使用FcR阻斷劑，幾乎無(wú)非特異染色。
使用REAfinity類(lèi)抗體時(shí)，僅需選用通用型同型對(duì)照抗體。
REAfinity抗體無(wú)輕鏈干擾，抗體純度更高。
以下是REAfinity?同型對(duì)照抗體的分類(lèi)，對(duì)！僅有這四類(lèi)，只需要根據(jù)您的配色方案和抗原表達(dá)位置選擇通用型的同型對(duì)照即可：
如：REA Control (S)-APC，即為用APC標(biāo)記的REA抗體檢測(cè)膜表面型抗原時(shí)可選用的同型對(duì)照抗體。
REAfinity重組基因工程改造抗體，讓您的流式分析/分選實(shí)驗(yàn)更加精確，更加穩(wěn)定！